CFX96RT-PCR仪
CFX96 Touch Real-Time PCR System
发布时间:2022年04月15日   作者:李港    阅读次数:4147

利用水稻品种ZH11生长2周的幼苗进行20%PEG水分胁迫处理,分别提取对照组(处理前)及实验组(处理12h后)的水稻幼苗RNA,经过消化及反转录后,利用BIO-RAD The CFX96 Touch Real-Time PCR System对参与调控活性氧代谢相关基因(OsCATB、OsAPX1、OsPOX1、OsPSCR、OsCAX1a)进行表达量检测,每个样品设置3个技术重复,以水稻泛素融合蛋白基因Ubiquitin(LOC_Os03g13170)作为内参基因,根据所得Cq值用2-△△CT法计算,结果如下:

 

每个样孔在每个循环的RFU(relative fluorescence units)值如下图:

 

样孔的Cq(quantification cycle)值示例:


 

正常的样品孔熔解曲线为单峰(若出现双峰,则考虑是否引物设计不合理或者引物过量引起的),如下图:

 

将提取的RNA样品进行重复实验,所得的基因相对表达量结果与上述结果一致。

The CFX96 Touch Real-Time PCR System性能稳定,重复性好,通过测定基因拷贝数,可以快速、灵敏地检测各种生物样品中基因的相对表达量,比如植物在响应不同环境变化时基因表达量的变化、植物不同组织中同一基因的表达量差异等。